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生物技術專業介紹

更新時間:2016-06-17 15:51:17點擊次數:915次
  生物技術專業介紹在 病原體急性感染的診斷中,通常需檢測IgM抗體,如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測和TORCH項目的系列IgM檢測等。IgM抗體也有使用間接法測定的,如目前在市場上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測試劑盒。在使用 間接法測IgM抗體時,由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體,其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競爭與固相抗原結合,從而干擾IgM抗體的檢 測。
  在 生物技術專業介紹病原體急性感染的診斷中,通常需檢測IgM抗體,如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測和TORCH項目的系列IgM檢測等。IgM抗體也有使用間接法測定的,如目前在市場上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測試劑盒。在使用 間接法測IgM抗體時,由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體,其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競爭與固相抗原結合,從而干擾IgM抗體的檢 測。
因 此,在使用間接法測定IgM抗體時,通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或SPA預處理,以去除IgG的干擾。這樣不但測定較為繁瑣,而且影響測定的特異性 和靈敏度。目前,常用的IgM抗體檢測方法為捕獲法,即以抗人IgM抗體(抗人u鏈)作為固相抗體,當加入血清標本時,其中的IgM類抗體(特異的和非特 異的)即可被固相抗體捕獲,再加入特異抗原,其與固相上捕獲的IgM抗體結合后,加入酶標抗特異抗原的抗體,最后加入底物顯色。具體操作步驟如下:
1.首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40℃下過夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗體,洗滌去除未與固相結合或結合不緊的抗體后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,洗滌去除未結合的部分及雜質。
2.加入含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等,溫育一定時間后洗板;此時,待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反應而吸附于固相上。
3.加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等,溫育一定時間后洗板;此時,特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發生反應。
4.加入酶標記的抗特異抗原的抗體,溫育一定時間后洗板;此時,在固相上即形成相應的抗原抗體復合物。
5.加入酶底物,溫育顯色測定(如圖)。
本 方法要著重注意的是RF(1gM類)及其他非特異IgM的干擾。RF(1gM類)由于其能與固相抗人u鏈抗體結合,并可與隨后加入的酶標抗體(動物 IgG)反應,從而導致假陽性反應。而非特異IgM由于其在第一步溫育中,可與特異IgM競爭與固相抗體結合,所以會影響測定的靈敏度。因此,使用本法測 IgM,必須對臨床樣本進行適當稀釋。樣本稀釋后,上述產生干擾作用的非特異IgM含量減少,而特異IgM由于處于相應病原體的急性感染期,滴度很高,一 定稀釋后,不會有明顯影響,況且,在某些病原體如HBV的慢性感染階段,IgM類特異抗體也能持續存在,只不過滴度要低很多。
因 此,如不對血清樣本稀釋,就直接檢測,即使是沒有非特異IgM的干擾,陽性測定結果也沒有急性感染的診斷價值。現在,有些試劑生產廠家,為了迎合臨床實驗 室減輕勞動強度、簡便操作的要求,生產了不需對樣本進行稀釋的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA試劑盒,現有不少實驗室也在使用。鑒于上面提到的 原因,我們建議臨床實驗室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等類檢測時,應使用對樣本進行稀釋的試劑盒,以保證檢測的臨床價值。
原文地址:http://www.seekbio.com/biotech/Immunity/elisa/2011/m819333426.html
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